SYLABUS:
Hlavní cíle kurzu jsou: porozumění základům metod práce s biologickým materiálem a jeho charakterisace. Zahrnuje metody desintegrace tkání, metody isolace a purifikace enzymů a biopolymerů, zvl. chromatografické metody, elektromigrační metody. Dále stanovení čistoty, vlastností enzymů a biopolymerů. Spektroskopické, elektrochemické a fyzikální metody biochemické analýzy.
TÉMATA PŘEDNÁŠEK
1. Úvod. Zásady práce s biologickým materiálem. Strategie a plánování.
2. Desintegrace tkání a buněk. Centrifugace a sedimentační analýza.
3. Fázové separace. Srážení a extrakce. Membránové separace. Zahušťování a sušení. Úprava vody.
4. Chromatografické metody. Obecné principy a charakteristiky. Chromatografie adsorpční a rozdělovací. Iontoměničová chromatografie, chromatofokusace.
5. Chromatografie reverzně fázová a iontově párová. Hydrofobní chromatografie Chromatografie gelová. Chromatografie afinitní. Plynová chromatografie.
6. Elektromigrační metody. Obecné charakteristiky a vlivy. Elektroforesa volná a zónová.
7. Izoelektrická fokusace. Isotachoforesa. Blotting
8. Metody určování velikosti a tvaru makromolekul. Hmotnostní spektroskopie. Koligativní metody, osmometrie.
9. Viskosimetrie. Translační a rotační difuse. Rozptyl světla a Roentgenova záření rentgenostrukturní analýza. Elektrochemické metody v biochemii. Princip, rozdělení. Potenciometrie, ISE. Bioselektivní elektrody.
10.Amperometrické metody. Polarografie a voltametrie, biosensory. Kalorimetrie, typy kalorimetrů, biochemické aplikace. Speciální aplikace biochemických metod rychlé reakce, iontová výměna. Analýza vazby ligandů na makromolekuly, metody stanovení vazebných parametrů.
11. Elektronová spektra molekul, přechody, základní a excitovaný stav, vliv prostředí, UV-VIS spektrofotometrie, použití ke stanovení látek, použití ke studiu struktury bílkovin
12. Luminiscenční metody, kvantový výtěžek, vliv prostředí, Spektrofluorimetrie, princip, užití ke stanovení látek, použití ke studiu konformace bílkovin, zhášení fluorescence transfer energie, polarizovaná, fluorescence, fosforimetrie.
13. IR spektroskopie a její užití ke studiu struktury bílkovin, Ramanův rozptyl a jeho použití ke studiu struktury bílkovin. Chiroptické metody a jejich princip, ORD a CD a jejich použití ke studiu konformace bílkovin .
14. NMR, EPR spektra a jejich použití ke studiu struktury bílkovin, Mossbauerova spektroskopie a její použití v biochemii,
TÉMATA PRAKT. CVIČENÍ
Není
UČEBNÍ OPORY – (skripta; PP-prezentace; Video-prezentace; e-learning)
PP (připravuje se e-learning)
- Kalous, Vítěz. Metody chemického výzkumu. 1. vyd. Praha : SNTL - Nakladatelství technické literatury, 1987. 430 s. info
- Anzenbacher, Pavel - Kovář, Jan. Metody chemického výzkumu pro biochemiky. 1. vyd. Praha : Ministerstvo školství ČSR, 1986. 199 s. info
- Kalous, Vítěz - Pavlíček, Zdeněk. Biofyzikální chemie. 1. vyd. Praha : Nakladatelství technické literatury, 1980. 349 s. info
OVĚŘENÍ ZNALOSTÍ (cvičné a zkušební testy)
Ústní zkouška